Easy Editing Cas12a Enzyme

1. 产品简介：

Cas12a酶，又称 Cpf1 酶，是一种存在于细菌和古菌中的RNA引导的核酸内切酶。Cas12a 与常见的Cas9酶有所不同。Cas12a识别富含胸腺嘧啶（T）的PAM序列，而 Cas9 通常识别富含鸟嘌呤（G）的 PAM 序列，这使得Cas12a能够靶向基因组中更多样化的位点。Cas12a 只需一条 crRNA 即可发挥功能，无需额外的tracrRNA，简化了 RNA 设计和制备流程。此外，研究表明，Cas12a 的脱靶效应相对较低，能更精准地作用于目标基因，提高了基因编辑的安全性和可靠性。

Easy Editing Cas12a Enzyme所采用的Cas12a经基因工程改造，在酶的N端和C端都加入NLS核定位序列，显著提高了Cas12a酶向细胞核内的转运。编辑效率高达 85-90%且无细胞毒性。是除Cas9酶之外用于KO/KI基因编辑的理想Cas酶。

2. 产品组份和运输储存条件：

*备注：本试剂的Cas12a酶浓度为10ug/uL，Cas12a分子量约为130kD，换算成摩尔浓度为77uM（77pmol/uL）。每次使用1.5uL约等于116pmol。配置RNP时，通常按照Cas9酶：crRNA=1.2~2范围内加入，对应的加入量建议为140pmol~232pmol之间，假如crRNA的浓度为100uM，则加入体积为1.4uL~2.3uL，常用1.5uL。

运输和储存条件：本品需干冰运输。到货后放置在-20℃冰箱3个月内用完，长期不使用须保存于-80℃冰箱。

3. 应用案例：对人体原代T细胞，敲除内源性TRAC，并敲入人工CAR序列，构建CAR-T细胞

图：采用本试剂盒，配合AAV病毒转导，一次基因编辑，CAR-T阳性率达到91.3%。

4. 其他相关产品

6. 引用文献

(1) Ran, F., Hsu, P., Wright, J. et al. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nat Protoc 8, 2281–2308 (2013).

(2) Qi LS, Larson MH, Gilbert LA, Doudna JA, Weissman JS, Arkin AP, Lim WA. Repurposing CRISPR as an RNA-guided platform for sequence-specific control of gene expression. Cell. 2013 Feb 28;152(5):1173-83.

(3) Ren J, Liu X, Fang C, Jiang S, June CH, Zhao Y. Multiplex Genome Editing to Generate Universal CAR T Cells Resistant to PD1 Inhibition. Clin Cancer Res. 2017 May 1;23(9):2255-2266. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-16-1300. Epub 2016 Nov 4. PMID: 27815355; PMCID: PMC5413401.

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